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糖蛋白染色试剂盒 HZD5501

糖蛋白染色试剂盒

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¥ 1030.00 /盒
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糖蛋白染色试剂盒

 产品简介:                                                

本产品用于PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上糖蛋白的检测。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色。该试剂盒检测的灵敏度一般可以达到微克级别,但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关,可以用于 SDS-PAGE 和2D电泳的凝胶检测,也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测(但背景较高),还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

按照每次使用25 ml糖蛋白染色试剂计算,本产品可以染色 8-10块mini-PAGE(8×10cm)胶或印迹膜。

● 产品组成:

产品编号

产品名称

规格

贮存

运输

HZD5501-1

氧化试剂

2.5 g

常温避光

RT

HZD5501-2

糖蛋白染色试剂

250 ml

常温避光

RT

HZD5501-3

还原试剂

1.25 g

常温避光

RT

HZD5501-4

阳性对照(辣根过氧化物酶)

1 mg

-20

RT

HZD5501-5

阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)

1 mg

-20

RT

HZD5501

5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液

1 ml

-20

RT

-

250ml棕色塑料瓶

2

-

-

-

说明书

1

-

-

 储存条件

按照标签温度贮存,常温运输。开封后一年有效。

●实验前准备:

1. 配制 3%醋酸溶液:将 15 ml 自备的冰醋酸与 485 ml 超纯水混匀,常温保存备用。

2. 配制 50%甲醇溶液:将 250 ml 甲醇与 250 ml 超纯水混匀,常温保存备用。

3. 配制氧化试剂溶液: 将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250ml空塑料瓶中, 然后加入250 ml的超纯水,充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,常温保存备用。

4. 配制还原试剂溶液: 将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的 250ml 空塑料瓶中,然后加入 250 ml的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,常温保存备用。

5. 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液:取0.4 ml 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液,加入1.6 ml超纯水,-20℃贮存备用。

6. 配制阳性对照(辣根过氧化物酶)溶液:向装有 1 mg 辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上样缓冲液,所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即为 1mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用, 其余的放-20℃长期保存。 对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。

7. 配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)溶液:向装有 1 mg 大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上样缓冲液(自备),所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用,其余的放-20℃长期保存。对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。

8. 样品稀释:用 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为 1 mg/ml,SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为 1×。对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 5-10 μl 的样品即可,上样前95℃处理5分钟。。

● 凝胶染色的操作步骤(膜染色从步骤3开始):

注意事项:

1.以下步骤仅针对0.75mm厚度大小8×10cm的凝胶,1-1.5mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间。

2. 请在通风橱中进行以下操作。

固定:

取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶,在50 ml 50%甲醇溶液中,摇床慢摇30分钟,弃甲醇溶液。

漂洗:

50 ml超纯水洗涤凝胶两次,每次摇床慢摇10分钟,弃超纯水。

氧化:

凝胶中加入 25 ml 氧化试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。

漂洗:

50 ml超纯水洗涤凝胶3次,每次摇床慢摇5分钟,弃溶液。

染色:

凝胶中加入25 ml糖蛋白染色试剂,摇床慢摇15 分钟,糖蛋白会在5-10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低,适当延长显色时间。弃染色溶液。

注:若糖蛋白染色试剂中有晶体析出,只需取上清液即可,不要加热溶解晶体。

染色步骤会产生有刺激性气味气体,请在通风橱中操作。

还原:

凝胶中加入 25 ml 还原试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。此时凝胶背景略带红色。

漂洗:

加入50 ml 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次,每次10分钟,直至胶背景红色变浅,接近淡红色或无色,此时红色糖蛋白主带清晰可见。

保存:

胶块保存在50 ml 3%醋酸溶液中。

● 实验记录表格

实验日期:

编号

步骤

体积

时间



凝胶尺寸 8×10 cm

0.75mm胶或膜

1

固定

50 ml

30 min

膜从步骤3开始

2

漂洗

2×50 ml

2×10 min

3

氧化

25 ml

15 min

4

漂洗

3×50 ml

3×5 min

5

染色

25 ml

15 min或更长

条带变为品红色

6

还原

25 ml

5 min

7

漂洗

3×50 ml

3×10 min

漂洗后凝胶背景变浅

8

保存

50 ml

-

实验示例:


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