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一般细胞长至80%-90%密度则需要传代消化，贴壁细胞传代前，需要把细胞用消化试剂从培养容器表面解离出来，细胞得以分离成单个悬液传代至含新鲜培养基的新容器内。
细胞消化方法
这个方法是用得最多的，主要是用胰蛋白酶，一般浓度在0.25-0.5% ，消化的时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化，一般是从从几分钟到几十分钟不等。
一般来说，0.25% 的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下消化1-5 分钟就足够了。
需要注意的是，Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，因此不含Ca2+、 Mg2+ ，含EDTA的胰酶活性更高;
最后，可用含血清的培养基终止胰酶消化。胰酶对温度敏感，需在-20℃运输和保存，不能反复冻融。
离子螯合剂不破坏细胞表面分子，仅与CAMs螯合，因此，如果检测细胞表面分子的话，尽量，甚至是一定不要用酶消化法。
一般用得最多的是EDTA，一般浓度在0.02% 左右，作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。
注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶，因此配制时应调节好酸碱度，这种方法相对来说操作简单，无需使用蛋白或血清终止。
也就是直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。
这种仅能用于细胞传代时，因为它无法使组织上的细胞脱落下来。本方法的原理，主要是因细胞冷冻后收缩，从而从培养瓶上脱落下来。优点是：对细胞损伤小，不需要中止或洗细胞，也不需要另外配制消化液。特别适用那些贴壁不是特别紧，又特别娇气的细胞，不足是细胞可能会常小片脱落。
细胞什么状态才算消化好了？
不是细胞分布很离散的单个圆形才算消化好了
一般显微镜观察贴壁细胞，只要能移动了，多半呈沙状移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了， 说明细胞之间，细胞与培养皿之间的附着已经消失了，细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。
2. 不是所有细胞消化后都会变成圆形
有些细胞(比如U87，U251)消化好了也不会变成圆形，只是呈半沙状。
3. 有些细胞即使变圆，也有脱落的细胞，但还是没消化好
要等到大部分细胞脱落培养皿底部才可以停止消化，否则很难吹打下来，这种情况一般发生于难以消化的细胞。
4. 对于一些特殊的细胞需要消化过一点
有些细胞吹成单个细胞反而对细胞的状态会好一点，一但成团，细胞状态立马变差，比如LNCAP细胞。
消化过度的主要特征有哪些?
会导致相当一部分细胞损伤和死亡，刚传代后的培养液表面漂浮细胞团，肉眼可见漂着小片白色膜状物。如果细胞团中都是死细胞，则不会贴壁。如果细胞团中仍存在有活力的细胞，就会贴壁造成局部细胞密度不均匀，该局部较快形成中央坏死细胞区。
细胞消化过度该如何处理？
马上用培养基中和，用吸管吹打细胞， 收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3 分钟。弃上清，用全培重悬，换新的培养瓶继续培养!! 状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落，在换液的时候可以清除掉!!
为什么你的细胞消化不下来？
有些细胞贴壁比较牢，因此每次消化吹打之后总会剩下一些细胞，或者细胞长得较好而培养瓶太久没换，为了顾全大部分有活力的细胞，细胞消化要适可而止。
不同种类的细胞所需消化时间也不同。因为贴壁细胞的消化一般在2分钟左右，对于个别出现的细胞难以消化，经过多次消化和反复吹打之后仍无效，就放弃吧。
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