实时定量PCR Array技术服务

_{^{qPCR Array是信号通路基础生物学研究和临床疾病研究的重要工具。这种功能分类芯片运用成熟的SYBR Green荧光定量PCR技术，专注于一个信号通路中基因的表达水平检测。与传统的高密度表达谱芯片相比，Q-PCR array具有针对性强、灵敏度高、准确可靠等优点。 芯片上的基因包括了与研究对象有确定关系的基因，或至少是与研究对象的关系有待考证的基因。如果研究对象是某一生物学通路的基因，则使用针对该类基因的功能分类基因芯片比使用高密度表搭配芯片更加有效便利。}}

       公司是Qiagen旗下子公司，在Q-PCR array领域具有国际领先地位。目前公司针对不同的信号通路和疾病相关基因设计了150多款功能分类芯片，种属包括人、小鼠、大鼠、果蝇、猪、兔、鸡等，格式分为96孔和4 x 96孔两种。针对客户的需求，还有个性化定制芯片服务。BioTNT是的合作伙伴，能为您提供完善的功能分类基因芯片技术服务，您只需提供保存完好的组织或细胞样品，我们就可为您完成实验操作和数据分析。

   同时提供自产QPCR Array 产品，并提供定制QPCR Array 产品。

BioTNT QPCR芯片特点:

l   灵敏度高，样本使用量低；

l   线性范围广，可同时检测表达水平差异大的基因；

l   每个基因的检测引物优化后保证高扩增率和产物单一；

l   重复性高，Ct值的平均差异只有0.25个循环；

BioTNT QPCR Array芯片技术服务流程：

1、选择您要检测的基因；

        或者联系Biotnt提供基因名称(发送到sales@biotnt.com )；

2、确定是采用目录QPCR Array还是定制QPCR Array；

       确定PCR Array 产品号，确定样本数量，确定是做单孔还是重复；与BioTNT 签订产品合同和服务合同，付定金； 

3、客户提供样本；

 4、BioTNT 对客户提供的样本进行干冰取样，RNA 抽提

 5、客户样本RNA抽提：

  a) 若实验对象为组织样本，取适量（50-100mg）新鲜组织或正确保存的样本，加1mL的Trizol，匀浆后抽提RNA，采用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104，RNase-Free DNase Set (50)，79254进行抽提RNA，在抽提的过程中加入DNase，去除基因组DNA。

b)若实验对象为细胞样本，每份样本取1*106-107细胞，完全吸去培养液后加 1mL的Trizol，裂解后提取RNA，采用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104，RNase-Free DNase Set (50)，79254进行抽提RNA，在抽提的过程中加入DNase，去除基因组DNA。

6、RNA质量检测

a) 采用NanoDrop测定RNA浓度，OD比值（260nm和280nm处的OD值），并评测RNA质量。

质量符合要求的可进行下一步实验；

RNA质量如需进一步评估，可以采用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析（选测）。

不符合要求的需要重新提供样品送检；

7、cDNA模板制备

均一化RNA 浓度，按照cDNA第一链合成试剂盒将样本RNA逆转录为cDNA。

8、实时定量PCR

 实验前先采用CDNA 选测内参基因进行第二次质检；质检合格的进行正式QPCR Array 实验；

 根据说明将cDNA模板适当稀释后加入到实时定量PCR反应混合液中，然后QPCR Array板上（预包被了特异性引物）加入等量反应液，采用ABI ViiA7进行实时定量PCR反应。

9、数据处理：

 利用仪器配套软件计算PCR芯片中的每个基因的Ct值。

按照BioTNT QPCR Array 分析软件，分别copy test sample和control sample 的CT值到excel 表中。

根据excel 表软件，计算是否符合质量控制，选择内参基因，计算基因的表达上调或者下调，筛选出有价值的基因。

10、提供实验报告：

包括详细的实验方法及实时定量PCR芯片实验结果及相关图表。

具体包括：

包括原始数据CT 值；原始数据文件；

包括实验结果；3D-Profile 图表；scatter plot 图表；volcano plot图表；

BioTNT 实时定量PCR  检测使用的仪器

进行检测使用的主要仪器为QPCR， BioTNT 使用life technology最新款的ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统进行microRNA的QPCR 检测。

ViiA™ 7实时荧光定量PCR系统在单一的高性能仪器上融合了您需要的所有实时荧光定量PCR特性，从而帮助您优化研究效率。ViiA™7系统具有简单的工作流 程、直观的软件、触控屏界面以及使误操作降至最少的单键实验方案，可提供出众的重复性和最小的孔间和仪器间差异。

产率
ViiA™ 7系统适用于中等至高通量实时荧光定量PCR，可提升您的实验室效率。
快速的加热块更换——前开门设计使热循环加热模块的更换变得更容易，无需移动旁边的设备，如机械臂或计算机
简单的触摸屏界面——仪器触摸屏提供了一键式实验方案，可快速简单地完成各种应用Assay的设置
自动化兼容性——ViiA™ 7系统结合了Applied Biosystems® Twister® II 机器人，使您在自动化环境下实现效率最大化

整合
可与TaqMan® Array微流体芯片和 Applied Biosystems® TaqMan® Assay完全兼容：实时荧光定量PCR分析的金标准，具有高灵敏度、高特异性和宽动态范围。
384 孔通量且无需机器辅助——采用TaqMan® Array微流体芯片，无需移液机器人或复杂的移液装置；只需加入您的样本和预混液，即可在ViiA™ 7系统上运行
与全套 TaqMan® Assay 兼容——ViiA™ 7系统已经过优化，可用于所有TaqMan® Assay(包括 MicroRNA、蛋白质、非编码 RNA 和Pri-miRNA Assay)，从而获得清晰简洁的数据

性能
ViiA™ 7系统具有下列特点：
OptiFlex® 系统——增强型荧光检测，可实现准确且灵敏的数据分析
最大程度的多重分析能力——6 个可自由组合的激发和发射滤光片通道，可实现最多的染料组合和最大的多重反应能力
灵活的数据采集——多种升降温方法检测形式为升降温阶段的荧光数据采集提供了更多的灵活性
精确定量——在单色反应中可检测出低至1.5倍的拷贝数差异

ViiA™ 7软件具有：
直观的界面和创新的设计
便捷的自动化操作
更强大的数据分析
与高通量完全兼容

可扩展的软件构架
提供可选的附加性能，可升级至现有软件。
遵循美国联邦法规第21章第11节(21 CFR Part 11)——可选的SAE模块，提供记录安全、审计和电子签名信息，从而实现全方位的数据可追溯性
高分辨率熔解曲线(HRM)——采用内置的MeltDoctor™ 实验方案和校准，您可以缩短优化运行的时间，从而将更多的时间用于分析您的结果。通过方便的软件设置即可根据需要设置基因型种类的数目。

本产品仅供科研使用。不能用于人和动物治疗等其它临床诊断使用！