植物总蛋白提取试剂盒(适用于模式植物)
● 产品简介
本产品用于快速提取模式植物的总蛋白,可以处理各种常见模式植物如拟南芥、小麦、烟草、玉米、水稻等植物的叶片、茎和根等。得到的蛋白可用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。
该试剂盒对模式植物的幼嫩组织有更好的提取效果,衰老组织和富含多糖多酚植物的蛋白提取效果不佳。此类植物的蛋白提取可以选择通用型植物蛋白提取试剂盒(货号:RTD8103)。
该试剂盒含有除丙酮外的其他所有试剂,使用方便,能在2小时内得到高纯度的蛋白样品。
每次提取使用0.7 ml试剂B-植物蛋白提取缓冲液I计算,该试剂盒可以使用20次。
● 使用方法:
实验准备材料:
液氮;研钵;1.5ml离心管;丙酮;70℃水浴锅;干浴器;冷冻离心机;制冰机;涡旋振荡器。
I 样品破碎:
1. 取植物样本(每个样本取0.2-0.5克),在液氮条件下,用研钵充分研磨成粉末。
注:此步骤非常重要,样本研磨越细越好,研磨不彻底会导致蛋白浓度偏低。
II 沉淀杂质:
2. 取1.5 ml离心管,加入1 ml即用型试剂A(按照下表配制),迅速将粉末加入其中,漩涡混匀,RT 放置5分钟。
即用型试剂A-样本杂质去除剂配制
即用型试剂A | |||
1个样品 | 2个样品 | n个样品 | |
试剂A-样本杂质去除剂 | 0.5 ml | 1 ml | n×0.5 ml |
丙酮 | 0.5 ml | 1 ml | n×0.5 ml |
DTT(100×) | 10 μl | 20 μl | n×10 μl |
3.12000g4℃离心5分钟,去除上清,保留沉淀。
注:观察沉淀颜色,如沉淀颜色为绿色,继续步骤4;如沉淀颜色为浅色或白色,跳过步骤4,直接进行步骤5。
4. 沉淀中加入1 ml即用型试剂A,漩涡混匀,RT放置5分钟,12000rpm4℃离心5分钟。
5. 沉淀中加入1 ml 预冷的丙酮(自备,试剂盒不提供)和10 μl DTT溶液,漩涡震荡(此时溶液状态应为白色悬液),彻底重悬,12000rpm4℃离心5分钟,去除上清,收集沉淀。
6. 快甩离心数秒,残留上清用移液器彻底吸弃,沉淀物通风晾干1-2分钟至沉淀干燥。
注:沉淀不能过分干燥,否则会影响以下步骤蛋白的溶解性。
III 蛋白提取:
7. 蛋白沉淀中加入0.7 ml 即用型试剂B(按照下表配制),漩涡震荡,彻底重悬沉淀(此时溶液状态为悬浮溶液);70℃水浴1小时,间歇混匀。
即用型试剂B-植物蛋白提取缓冲液配制:
即用型试剂B | |||
1个样品 | 2个样品 | n个样品 | |
试剂B-植物蛋白提取缓冲液I | 0.7 ml | 1.4 ml | n×0.7 ml |
蛋白酶抑制剂混合物(100×) | 7 μl | 14 μl | n×7 μl |
DTT(100×) | 7 μl | 14 μl | n×7 μl |
8.12000g4℃离心10分钟,小心取上清(通常可取600 μl)于1.5ml离心管中,不要吸取沉淀。
9. 蛋白样品-20℃贮存或进行下游电泳及Western Blot等实验。
注: ① 如要浓缩蛋白,可以选择蛋白浓缩试剂盒
② 由于提取过程中使用了DTT,为了避免对蛋白浓度测定的影响,建议蛋白浓度测定使用Bradford方法。