细菌蛋白提取试剂盒

● 产品简介

细菌蛋白提取试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎等复杂的操作步骤，有效避免了外源蛋白的污染。该试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制剂PMSF，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP、Western blot实验；提取体系中不含EDTA，可直接通过Ni-NTA 等纯化填料进行蛋白纯化。该试剂盒既可适用于小量蛋白表达检测，也适用于大量蛋白的表达纯化试验。

每次提取使用1ml 缓冲液计算，该试剂盒可以使用100次。

●    贮存条件：

试剂组份按照温度贮存，可保存 12个月。

●    使用方法：

1. 8,000 rpm常温离心 3 min 后，弃上清，尽量弃除残余培养基，留取管底部菌体。

2. 即用型提取缓冲液配制：每ml 提取缓冲液中加入10 μl PMSF，10 μl 溶菌酶，1 μl DNase I，混匀后4℃贮存备用。注：该缓冲液现用现配，不建议贮存。

3. 按照原菌液1/2-1/5体积加入即用型提取缓冲液，即2-5 ml菌液收集的菌体加入1 ml 提取缓冲液，用吸头吹打至无可见细胞团块，重悬菌体。

4. 20-37℃孵育 15-20 min，期间轻弹离心管数次以加速裂解。

注：若蛋白表达量较低，建议结合超声破碎，置冰上后，采用300w，10s 超声/10s 间隔，超声20min，至菌液变清亮。

5. 裂解完成后 13,000rpm4℃离心5 min，将上清（上清中即为可溶性蛋白）转移至新的离心管中，直接进行下一步纯化或检测实验。

6. 蛋白提取物分装后建议-80℃保存。