红细胞裂解液

保存条件：

    4℃保存，一年有效。室温保存， 3个月有效。

注意事项：
    本裂解液为无菌产品，请注意保持无菌，使用本产品时宜在超净工作台内进行。
    如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的
溶液。

使用说明：
对于组织细胞样品：
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则
   加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的
   一些检测。
5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃
   上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更
   佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于组织细胞样品无需洗涤的快速操作步骤：
1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。
2. 对于0.2ml细胞沉淀加入1ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。本步骤在室温或4度操作均
   可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
4. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
5. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的
   一些检测。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
   说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程中的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好
   一些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积
   的离心管。
对于血液样品：
1. 取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。
2. 加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则
   加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4度操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经
   足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞
   裂解。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的
   一些检测。
5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃
   上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更
   佳。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
   注意：对于微量或少量的血液样品，可以在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加
   入10倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足
   够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶
   尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
对于血液样品无需洗涤的快速操作步骤：
1. 每1ml新鲜抗凝血中加入10ml红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解4-5分钟。本步骤在室温或4度操作
   均可。注意：对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，
   但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，混匀。
3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的
   一些检测。
5. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
   说明：对于常规步骤，多一步洗涤过程的离心，但可以节省洗涤液的用量，并且洗涤效果也更好一
   些，同时不需要大体积的离心管。快速步骤少了一次离心，但洗涤效果略差一些，同时需要大体积的
   离心管。