SYBR 核酸染料
● 简介:
SYBR Green是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单,至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低,可适用于多种电泳分析。
SYBR Green适合于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳,脉冲电场凝胶电泳以及毛细管电泳等。
SYBR Green与双链DNA的亲和力非常高,因此可以用做电泳前染色,对分子生物学中常用的酶(如:Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。另外,SYBR Green与EB相比,诱变能力大大降低。
● 贮存:4℃,避光保存。
● SYBR Green使用方法:
注意:染料使用前应在室温下彻底融化混匀后使用。
SYBR Green后染方法(推荐方法)
1. 制作不含染料的凝胶,按照常规方法进行电泳。
2. 用pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释SYBR Green浓缩液(如50ml 1×TAE中加入5μl 染料),混匀,制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 紫外灯下观测。
SYBR Green预染方法
1. 制胶:按常规方法制备凝胶,凝胶温度降至60℃左右时加入10000×SYBR,使染料终浓度为1×,如40ml凝胶溶液中加入4μl染料。
2. 上样、电泳后紫外灯下观察。
● SYBR Green I使用注意事项
1.后染方法是推荐方法,能得到更好的电泳结果;由于SYBR对样品过量非常敏感,预染方法容易出现条带扭曲变形(建议泳道中每条带的含量不要超过5ng),请根据实际情况摸索出适合自己的实验程序,
2. SRBR对电泳缓冲液的pH要求严格,有效pH为7.5-8.0,电泳时尽量使用新鲜配制的缓冲液,并保证合适的pH范围。
3. SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
4. 使用酒精沉淀核酸中,SYBR Green可以全部从双链核酸上去掉。
5. 如果想对用 SYBR Green染过的胶进行 Southern blot,建议在预杂交和杂交溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS,可以有效去除SYBR。