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酵母基因组DNA提取试剂盒 HZG5409

酵母基因组DNA提取试剂盒

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¥ 730.00 /盒
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酵母基因组DNA提取试剂盒

 试剂盒内容及保存:

试剂盒组成

HZG5409

50次)

贮存方式

缓冲液YL

13 ml

常温

缓冲液YBL

13 ml

常温

缓冲液SE

15 ml

常温

DNA Wash Buffer (浓缩液)

13 ml

常温

缓冲液WB

30 ml

常温

洗脱缓冲液EB

15 ml

常温

蛋白酶K

1 ml

-20

Lyticase

1.6 ml

-20

RNaseA

0.5 ml

-20

Glass Beads

3 g

常温

吸附柱CG

50

常温

收集管(2 ml

50

常温

说明书

1


 储存条件和效期:

室温保存,12个月内有效。Proteinase K与Lyticase-20℃保存。缓冲液 YBL与缓冲液 YL可能有沉淀产生,37度水浴溶解后即可。

 产品简介:

酵母DNA提取试剂盒(Yeast DNA Kit)采用了一种新型的硅胶柱。在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀。纯化的DNA可直接用于PCR、Southern杂交和酶切等。

 准备工作:

1. 准备30℃,65℃,70℃水浴;无水乙醇;制冰机;1.5ml离心管;2ml离心管

2. 按照标签所示在DNA Wash Buffer中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。

3. 每次使用前请检查缓冲液YBL,缓冲液YL是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

 标准操作步骤:

如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 取1-3 ml 酵母培养物(不超过3×107 酵母细胞),12,000 rpm (~13,400×g )离心1分钟,尽量吸除上清(菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

注:可用分光光度计或平板培养法检测菌体量,一般对于酿酒酵母OD600值为1.0时,相当于1-2×107cell/ml。

2. 加入480 μl 缓冲液 SE,完全重悬细胞。加入30μl Lyticase溶液。30℃水浴处理30min。期间振荡几次。

注意:以处理时间为经验值,根据酵母菌株和酵母细胞数量的不同,孵育时间应该进行适当调整。 

3. 4000 rpm(~1500×g)离心10钟,弃上清,收集沉淀。加入200μl 缓冲液 YL重悬。加入50mg Glass Beads,剧烈涡旋5min。

4. 加入20μl  蛋白酶K,混匀。65℃水浴孵育直至裂解完全,孵育过程中,涡旋几次。一般来说1小时以内能彻底裂解。

5. 可选步骤:加入5μl RNaseA并反复颠倒混匀,在室温条件下孵育5分钟。

6. 12,000 rpm (~13,400×g )离心1分钟,转移上清至新的离心管中。

7. 加入220 μl 缓冲液 YBL,振荡15  秒,70℃放置10  分钟,溶液应变清亮。

注意:加缓冲液YBL 时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。

8. 加220 μl 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。

9. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30  秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

10.  向吸附柱中加入500 μl  缓冲液 WB,12,000 rpm (~13,400×g )  离心30  秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

11. 向吸附柱  中加入600 μl DNA Wash Buffer(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm (~13,400×g )  离心30秒,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。

12.  向吸附柱中加入600 μl DNA Wash Buffer,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30秒,倒掉废液,将吸附柱放入收集管中。

13. 12,000 rpm(~13,400×g)离心2 分钟,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

14.  将吸附柱转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μl  洗脱缓冲液EB或灭菌去离子水,室温放置2-5分钟,12,000 rpm (~13,400×g )  离心1分钟,将溶液收集到离心管中。

注:洗脱缓冲液体积不应少于50 μl,体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH  值在7.0-8.5  范围内(可以用NaOH将水的pH  值调到此范围),pH  值低于7.0  会降低洗脱效率;

15. DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

 DNA浓度及纯度检测:

基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。

 常见问题分析:

 

常见问题

可能原因

建议

堵柱子

样品量太多,裂解不完全,样品太粘稠

降低样品量;

延长Lyticase酶解时间;

延长加入缓冲液YBL和蛋白酶后的裂解放置时间

低浓度的DNA

柱子堵塞

见上

DNA残留在柱子上

增加洗脱液的用量,并在离心洗脱前将洗脱液EB65孵育5min

DNA洗涤不当

DNA Wash Buffer按说明书用无水乙醇稀释。

下游应用不好

提取的DNA含盐量高

DNA Wash Buffer如果必须按要求用无水乙醇稀释,必须室温放置。

提取的DNA含有乙醇

洗脱前,必须最高转速空甩柱子1min


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