2×CTAB提取缓冲液

● 产品编号及规格：

● 产品介绍：

    CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

    2×CTAB提取缓冲液成分：2%(w/v)CTAB，100mM Tris (pH 8.0)，20mM EDTA,1.4 MNaCl,，还原剂(随用随加) 。

● 储存条件：

   常温贮存一年。

● 实验操作步骤：

一 DNA提取：

   1. 2×即用型CTAB提取液（现用现配）配制：

按照终浓度0.2% （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

2. 取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。

3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中，立即加入65℃预热的0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液，65℃水浴30分钟，间歇混匀。

  注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。

4. 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm 离心10分钟。

5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中，加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm离心10分钟。

6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入0.6倍体积的冰冷异丙醇，轻柔混匀，冰浴30分钟。

7. 12000 rpm4℃离心10分钟。

8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分钟，吸弃乙醇。

9.4℃12000 rpm 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。

注：沉淀不能彻底干燥，否则不好溶解。

10. 加入30-50 μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA，-20℃保存备用。

二 RNA提取：

注：以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free。

1. 2×即用型CTAB提取液（RNase-free，现用现配）配制：

  2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC，如100 ml中加入100 μl DEPC，混匀后过夜处理，高温高压，即为2×即用型CTAB提取缓冲液（RNase-free）。按照终浓度1 % （v/v）加入还原剂，如1 ml 2×CTAB提取缓冲液（RNase-free）中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

2. 取50-100 mg新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末。

3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中，立即加入65℃预热的0.5 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液（RNase-free），65℃水浴5-10分钟，间歇混匀。

  注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。

4. 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，轻缓颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm 离心10分钟。

5. 将上清液转入另一1.5 ml离心管中，加入等体积氯仿，颠倒离心管混匀8-10次，常温12000 rpm离心10分钟。

6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中，加入1/2体积7.5 M LiCl（RNase-free）（货号：LC1030），轻柔混匀，-20℃ 30分钟。

7. 12000 rpm4℃离心10分钟。

8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇（RNase-free）漂洗沉淀，4℃12000 rpm 3分钟，吸弃乙醇。

9.4℃12000 rpm 1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台吹干沉淀。

注：沉淀不能过分干燥，否则不好溶解。

10. 加入30-50μl的RNase-free水溶解RNA，-80℃保存备用。