2×CTAB提取缓冲液
● 产品编号及规格:
货号 | 名称 | 规格 | 贮存 |
HZG5405 | 2×CTAB提取缓冲液 | 200 ml | RT |
HZG5405 | 还原剂 | 1 ml | RT |
说明书 | 一份 |
● 产品介绍:
CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v)CTAB,100mM Tris (pH 8.0),20mM EDTA,1.4 MNaCl,,还原剂(随用随加) 。
● 储存条件:
常温贮存一年。
● 实验操作步骤:
一 DNA提取:
1. 2×即用型CTAB提取液(现用现配)配制:
按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。
2. 取0.2-0.5克新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。
3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入65℃预热的0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液,65℃水浴30分钟,间歇混匀。
注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。
4. 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。
5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中,加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。
6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,冰浴30分钟。
7. 12000 rpm4℃离心10分钟。
8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,4℃12000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。
9.4℃12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。
注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。
10. 加入30-50 μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA,-20℃保存备用。
二 RNA提取:
注:以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free。
1. 2×即用型CTAB提取液(RNase-free,现用现配)配制:
2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC,如100 ml中加入100 μl DEPC,混匀后过夜处理,高温高压,即为2×即用型CTAB提取缓冲液(RNase-free)。按照终浓度1 % (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液(RNase-free)中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。
2. 取50-100 mg新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。
3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入65℃预热的0.5 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液(RNase-free),65℃水浴5-10分钟,间歇混匀。
注:CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。
4. 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。
5. 将上清液转入另一1.5 ml离心管中,加入等体积氯仿,颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。
6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入1/2体积7.5 M LiCl(RNase-free)(货号:LC1030),轻柔混匀,-20℃ 30分钟。
7. 12000 rpm4℃离心10分钟。
8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇(RNase-free)漂洗沉淀,4℃12000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。
9.4℃12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。
注:沉淀不能过分干燥,否则不好溶解。
10. 加入30-50μl的RNase-free水溶解RNA,-80℃保存备用。