RNAwait样品保存液
● 产品简介:
RNA高效保存液(RNAwait)是一种无毒的可直接使用的样品储存液,能使细胞内的RNA与RNA酶分离,可以快速可靠地保存动物组织、细胞内的RNA。组织获取后立即浸入RNAwait保存液中,在室温可以保存7天,4℃可以保存4周,-20℃、-80℃标本可以长期保存,RNA稳定存在不降解,取出后用各类方法抽提可以获得高质量的RNA。
● 保存条件:
15–25°C,保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37°C溶解后使用。
● 操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是:量宁多勿少。
建议在实际操作中不要称量组织,而直接根据目测结果加入RNAwait量,以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块,体积为125mm3=125μl,故应当加入1.25ml的RNAwait液。
2.将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,较小的组织直接取下,立即完全浸入RNAwait中。
注:组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0.5 cm的任意片状后保存,较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)则可以直接浸入RNAwait。
4.保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(注:4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时可能为液态,也可能为固态,如有结晶析出,也是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,直接转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
● 注意事项:
1. 组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3.保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复温到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
4. RNAwait在动物组织(如大鼠肝脏,脾脏)和细胞(如DH5α)RNA的保护中效果不错;植物材料种类繁多,没能一一测试(烟草和拟南芥叶片中的RNA能被RNAwait有效保护),建议预实验后再使用,