PCR产物纯化试剂盒
试剂盒内容及保存:
试剂盒组成 | HZP5202 (100次) | HZP5202 (200次) | 贮存方式 |
结合液PB | 100 ml | 2×100ml | 室温 |
3 M NaAc pH5.2 | 500 μl | 500 μl | 室温 |
漂洗液PW | 25 ml | 2×25 ml | 室温 |
洗脱缓冲液EB | 15 ml | 15 ml | 室温 |
吸附柱CA2 | 100个 | 2×100个 | 室温 |
收集管(2 ml) | 100个 | 2×100个 | 室温 |
说明书 | 1份 | 1份 |
储存条件:
本试剂盒在室温(15–25℃)干燥条件下,可保存12个月;更长时间的保存可置于2–8℃。(注意:当低温贮存时,使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10-20分钟,以平衡溶液温度。)
产品简介:
本试剂盒采用离心吸附柱结合独特的缓冲液系统,从酶切、PCR等反应溶液中纯化DNA片段,同时除去蛋白质、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒可回收100bp–10kb的DNA片段,回收率大于80%(<100 bp 和>10kb 的DNA片段回收率为30-50 %)。
每个吸附柱每次最多可吸附的DNA量约为10 μg。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等实验。
产品特点:
1 结合液PB为亮黄色,便于观察体系的pH是否合适。
2 操作快捷,单个样品操作少于10分钟。
操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1 在PCR反应液中直接加入5倍体积的PB液,颠倒混匀后,全部加入到吸附柱CA2中,10,000g离心30-60秒,到掉收集管中的废液,将吸附柱CA2重新放入收集管中。
注:● 如果PCR反应体系使用了石蜡油,无需去除,但要使用10倍体积的PB液。
● 如果反应体系小于50μl,用水补至50μl体系,再加入PB液。
● 如果体系体积大于700μl,请分次上柱,保证全部溶液均加入到吸附柱中。
2 向吸附柱CA2中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),10,000g离心30-60秒,倒掉废液,将吸附柱重新放入收集管中。
3 向吸附柱CA2中加入500μl漂洗液PW,10,000g离心30-60秒,倒掉废液。
4 将离心吸附柱CA2放回收集管中,10,000g离心2分钟,尽量除去漂洗液。
注意:此步必不可少!如果漂洗液有残留,将会影响回收效率和DNA质量,进而影响下游实验;离心后将吸附柱盖子打开,室温放置2分钟,这样将有助于彻底挥发残余乙醇。
5 将吸附柱放到一个干净离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟。10,000g离心2分钟收集DNA溶液。
注意:
● 可将洗脱缓冲液EB预热到60-70℃后再加到吸附膜上,这样可以提高洗脱效率。
● CA2柱的洗脱体积不应少于20 μl,体积过小将会降低回收效率。
● 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率
6 DNA产物-20℃保存。